POLİMERAZ ZİNCİR REAKSİYONU
• Polimeraz Zincir Reaksiyonu, DNA’nın belirli bir bölgesinin tüp içinde çoğaltılması işlemidir.
• Bu teknik ile DNA molekülünün milyonlarca hatta milyarlarca kopyasını yapmak mümkündür.
• PCR, 1985 yılında Cetus adlı biyoteknoloji firmasında çalışan Kary Mullis adlı araştırmacı tarafından bulunmuştur. Bu buluşu, Kary Mullis’in 1993 yılında Nobel ödülünü almasını sağlamıştır.
PCR,
• DNA dizi analizinde ve DNA haritalanmasında,
• Genetik hastalıkların teşhisinde,
• DNA parmakizi analizinde,
• İnsan Genom Projesi ve diğer Genom Projelerindeki araştırmalarda,
• Adli tıp örneklerinin genetik tiplendirilmesinde,
• Tarımda,
• Sistematik ve evrim çalışmalarında kullanılmaktadır.
• PCR tekrarlanan 3 basamak şeklinde gerçekleşir. Bu basamaklar;
1. Amplifiye edilecek DNA’nın yüksek sıcaklıkta denatürasyonu (94oC),
2. Primerlerin DNA üzerindeki hedef bölgelerle özgül hibridizasyonuna olanak verecek sıcaklıktaki annealing-birleşme reaksiyonu,
3. Taq DNA polimeraz enziminin yüksek aktivite gösterdiği sıcaklık olan 72oC’de primerlerin uzaması-tamamlayıcı zincir sentezi olarak tanımlanabilir.
Polimeraz zincir reaksiyonu için,
• Kalıp DNA molekülüne,
• 20-25 baz uzunluğunda ve kalıp zincirin 5’ve 3’ uçlarındaki DNA dizilerine komplementer olan sentetik oligonükleotitlere,
• Serbest dNTP’lere (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
• Taq DNA polimeraz enzimine
• Enzimin çalışacağı uygun koşulları sağlayan tampon sistemine ihtiyaç vardır.
…