Bu yöntem bazikleştirilen örneğin, kloroform ve sülfürik asit ile ekstraksiyonu sonucunda elde edilen çözeltinin 251 nm’de absorbans değerinin ölçümüne dayanmaktadır.
02. Kullanılan Kimyasallar
1N Sodyum hidroksit (NaOH) çözeltisi
Kloroform (analitik saf)
1N Sülfürik asit (H2SO4) çözeltisi
Kinin stok çözeltisi: 150 mg kinin tartıldıktan sonra 20-30 mL 1N H2SO4 de çözülür . Çözelti 100 mL’lik balonjojeye aktarılır. Kininin tartıldiğı kap bir kaç kez sülfürik asit ile yıkandıktan sonra çözelti 1N H2SO4 ile 100 ml ‘ye tamamlanır. Bu çözelti buzdolabında saklanmalıdır (1500 µg/mL)
03. Deneyin Yapılışı
Gazı alınmış örnekten, 100 ml’lik ayırma hunisine 10-20 ml alınır. Üzerine 3 ml 1 N NaOH ve 15 ml kloroform eklenerek 1 dakika süre ile çalkalanarak ekstrakte edilir. Kloroform fazı baska bir ayırma hunisine alınır. Örneğin üzerine iki kez daha kloroform eklenerek 1 dakika süre ile çalkalanıp, kloroform fazları başka bir 100 ml’lik ayırma hunisinde toplanır. Toplanan kloroform fazları üzerine 20 ml 1 N H2SO4 eklenerek birer dakika süre ile toplam üç kez ekstrakte edilir. H2SO4 fazlari 100 ml’lik bir ölçü balonuna alınır ve ayrma hunisi 1 N H2SO4ile yıkandıktan sonra balon çizgisine 1N H2SO4ile tamamlanır.
Spektrofotmetre cihazinin dalga boyu 251 nm’ye ayarlanarak cihazin 0 ayarı 1N H2SO4 ile yapılır.
03.01. Standard Eğrinin Çizimi
100 mL’lik balonjojeye 10 mL stok çözeltiden, alınarak hacim çizgisine kadar 1 N H2SO4 ile seyreltilir (150µg/mL= 150mg/L). 150 ppm’lik standart çözeltisinden 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 ve 6,0 mL alınarak 100 mL’lik balonjojelere koyulur ve hacim çizgisine kadar 1 N H2SO4 ile tamamlanır (Balonjojelerde ki kinin konsantrasyonu sirasi ile 1,5; 3,0; 4,5; 6,0; 7,5; 9,0 ppm (mg/L) dir)
Hazırlanan standartların 251 nm’de absorbansları 1N H2SO4‘e karşı okunarak konsantrasyon-absorbans standart eğrisi oluşturulur.
Daha sonra bilinmeyen örneğin absorbansı okutularak oluşturulan standart eğrisi yardımı ile konsantrasyonu bulunur.
04. Hesaplamalar
Örnekteki kinin miktarı
Kinin (mg/L) = (CxV) / m
C: Örneğin standart eğrisinden okunan konsantrasyonu
V: Örneğin toplam seyreltildiği hacim mL
m. Alınan örnek miktarı
